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國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口分光光度計(jì)怎么選擇
2020-10-12
國(guó)產(chǎn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和重復(fù)性、雜散光，光度準(zhǔn)確性和重復(fù)性，吸光度范圍，基線(xiàn)穩(wěn)定性等重要指標(biāo)上與進(jìn)口光度計(jì)相比有較大的差距，進(jìn)口產(chǎn)品的波長(zhǎng)范圍還可以擴(kuò)展到近紅外（大紫外）。
由于國(guó)產(chǎn)品在測(cè)量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，以及測(cè)量范圍、可擴(kuò)展附件等方面的不足，一些測(cè)試工作需要使用進(jìn)口分光光度計(jì)。
一般教學(xué)用途及要求的，建議使用國(guó)內(nèi)分光光度計(jì)；科學(xué)研究等特殊要求的，建議采購(gòu)進(jìn)口分光光度計(jì)。
分光光度計(jì)，又稱(chēng)光譜儀(spectrometer)，是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線(xiàn)的科學(xué)儀器。主要用于進(jìn)行以下定性定量分析：檢定物質(zhì)、與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照、比較最大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性、純度檢驗(yàn)、推測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定
分光光度計(jì)原理
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度；
I0為入射的單色光強(qiáng)度；
I 為透射的單色光強(qiáng)度；
T 為物質(zhì)的透射率；
k 為摩爾吸收系數(shù)；
L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)；
c 為物質(zhì)的濃度；
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
分光光度計(jì)類(lèi)型
分光光度計(jì)是一種分析測(cè)量光譜的儀器，因?yàn)樾枨蟮牟煌?，分光光度?jì)有著不同的種類(lèi)，比如可見(jiàn)分光光度計(jì)、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)和原子吸收分光光度計(jì)等等，下面為大家介紹幾種常見(jiàn)的分光光度計(jì)種類(lèi)區(qū)別是什么。
幾種常見(jiàn)的分光光度計(jì)種類(lèi)區(qū)別是什么
(1)可見(jiàn)分光光度計(jì)
用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光(400～760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱(chēng)為可見(jiàn)分光光度計(jì)。可在600nm測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
(2)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
紫外可見(jiàn)光譜儀用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光或紫外光(200～760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器?？梢詼y(cè)定核酸和蛋白的濃度，也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
紫外分光光度計(jì)又可分為單光束,假雙光束,雙光束。它們的用途又有區(qū)別。
單光束：適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。
雙光束：自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。
假雙光束也就是比例雙光束，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達(dá)檢測(cè)器，另一束通過(guò)樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測(cè)器。這種儀器的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化帶來(lái)的誤差，但是并不能消除參比造成的影響。
(3)紅外分光光度計(jì)
一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜，這是研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域，能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣。
紅外光譜法的特點(diǎn)是：快速、樣品量少(幾微克-幾毫克)，特征性強(qiáng)(各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖)、能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣以及不破壞樣品。
(4)熒光分光光度計(jì)
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
(5)原子吸收分光光度計(jì)
該法主要適用樣品中微量及痕量組分分析常規(guī)儀器之一。是材料分析及質(zhì)量控制部門(mén)進(jìn)行常量、微量金屬(半金屬)元素分析的有力工具。
分光光度計(jì)儀器組成
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
分光光度計(jì)使用方法
1.接通電源，打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，掀開(kāi)樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。
2.將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較高檔。）
3.根據(jù)所需波長(zhǎng)轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)選擇鈕。
4.將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。
5.在暗箱蓋開(kāi)啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤(pán)指針指向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針?lè)€(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測(cè)定管的光密度值，并記錄。
7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
注意事項(xiàng)
1．該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2．使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線(xiàn)應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
3．在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線(xiàn)上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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